logo

Analyse> Microscopische (bacterioscopische) studie van een Gram-gekleurd uitstrijkje bij de diagnose van infectieuze en inflammatoire processen

De informatie wordt alleen ter referentie op de site geplaatst. Zorg ervoor dat u een specialist raadpleegt.
Als u een fout in de tekst, onjuiste feedback of onjuiste informatie vindt in de beschrijving, laat dit dan aan de sitebeheerder weten.

Beoordelingen op deze site zijn de persoonlijke meningen van de personen die ze hebben geschreven. Do not self-medicate!

Vlek op de flora van vrouwen: wat bepaalt het, de snelheid en pathologie

Vlek op flora - vaak benoemd door gynaecologenanalyse. Wat laat hij zien en welke misvattingen bestaan ​​er in zijn account?

Deze analyse kan "algemeen" worden genoemd. Dit is de primaire diagnose, waarmee de arts de aanwezigheid van het ontstekingsproces in de vagina, urethra en het cervicale kanaal kan bevestigen of ontkennen, en ook bepaalde conclusies kan trekken over de mogelijke overgang of climacterische veranderingen bij de patiënt.

  • microscopisch (bacterioscopisch) Gram-gekleurd uitstrijkje is de officiële naam;
  • een uitstrijkje van de geslachtsorganen;
  • bacterioscopy;
  • Microscopie.

Gebruikt om infectieuze en inflammatoire processen te diagnosticeren. Met bacterioscopie kunt u bacteriën in de geslachtsdelen van de vrouw detecteren: de eenvoudigste micro-organismen - gonokokken, provocerende gonorroe, trichomonas - de veroorzaker van trichomoniasis. Ook zal een specialist in de microscoop enkele bacteriën, schimmels (Candida), sleutelcellen (een teken van bacteriële vaginose) zien. Het type micro-organisme wordt bepaald door de vorm, grootte en ook of het met een kleurstof is gekleurd of niet, dat wil zeggen gram-positief of gram-negatief is.

Daarnaast wordt in een uitstrijkje van elk punt (uit de vagina, urethra, cervicale kanaal) het aantal leukocyten in het gezichtsveld berekend. Hoe meer van hen - hoe meer uitgesproken het ontstekingsproces. Geschatte hoeveelheid epitheel en slijm. Vlak epitheel is vooral overvloedig bij vrouwen in de reproductieve leeftijd tijdens de ovulatieperiode - in het midden van de menstruatiecyclus.

  • vaginale candidiasis (spruw);
  • bacteriële vaginose (vroeger gardnerellose genoemd);
  • gonorroe;
  • trichomoniasis.

Als er geen duidelijke verschijnselen zijn van een van deze ziekten, maar een uitstrijkje slecht is, wordt een diepgaand onderzoek van het materiaal uitgevoerd - het terugstromende water wordt uitgevoerd.

Redenen voor het uitvoeren van seeding in de gynaecologie

  1. Als er een gematigd of groot aantal leukocyten in een uitstrijkje zit, maar de veroorzaker van de infectie is niet bekend. Sinds microscopie is er een ondergrens van detectie van micro-organismen: 10 tot 4 - 10 tot 5 graden.
  2. Als een microbe wordt gedetecteerd, om de gevoeligheid voor antibiotica te bepalen.
  3. Als er tekenen zijn van een schimmelinfectie. Om het type schimmels nauwkeurig te bepalen en een effectief antimycotisch geneesmiddel voor te schrijven.

Andere soorten schimmels Candida kan niet worden behandeld als er geen pathologische symptomen zijn.

Als er sleutelcellen worden gevonden (tekenen van bacteriële vaginose), maar ook andere microben zijn aanwezig. Voor identificatie.

Wat zijn de verschillen tussen opstuwing, uitstrijkje op de flora en de zuiverheidsgraad van de vagina?

In de onderzoeksmethode. Met een algemene uitstrijk wordt het op een stuk glas afgezette materiaal gekleurd met speciale kleurstoffen en bekeken onder een microscoop. En wanneer bacteriologisch onderzoek (kwekerij, cultuur, microbiologisch onderzoek) wordt uitgevoerd, wordt het eerst "gezaaid" op een voedingsbodem. En dan, na een paar dagen, kijken ze onder een microscoop - welke micro-organismen kolonies zijn gegroeid.

Dat wil zeggen, als we het hebben over express analyse, krijg je alleen een mening over het aantal leukocyten, epitheel en slijm. Zaaien is niet urgent

Ook met microscopie kun je snel de mate van zuiverheid uit de vagina bepalen. Hier beoordeelt de arts alleen de relatie tussen normale, voorwaardelijk pathogene en pathogene microflora.

Klassieke beoordeling van de zuiverheid van de vagina.

Wat artsen niet zien met microscopie

  1. Zwangerschap. Om het te bepalen, is een uitstrijkje niet nodig en maakt niet uit welk resultaat het zal tonen. U moet een bloedtest ondergaan voor hCG, een gynaecologisch onderzoek ondergaan door een arts of een echografie van de baarmoeder. U kunt choriongonadotrofine identificeren in de urine, maar niet in de afvoer van de geslachtsorganen!
  2. Kanker van de baarmoeder en de baarmoederhals. Om een ​​kwaadaardige degeneratie van het endometrium te diagnosticeren, is histologisch materiaal nodig en in grote hoeveelheden. En neem het rechtstreeks uit de baarmoeder met een afzonderlijke diagnostische curettage.

Baarmoederhalskanker en andere pathologieën (erosie, leukoplakie, koilocytose, HPV-schade, atypische cellen, enz.) Zijn gebaseerd op de resultaten van een cytologisch onderzoek. Deze analyse wordt rechtstreeks uit de cervix genomen, uit de transformatiezone, volgens een specifieke methode met Papanicolaou-kleuring (vandaar de naam van de analyse - de PAP-test). Het wordt ook oncocytologie genoemd.

  • Toont dergelijke infecties (zppp) niet als:
    • herpes;
    • chlamydia (chlamydia);
    • mycoplasma (mycoplasmose);
    • ureaplasma (ureaplasmosis);
    • HIV.
  • De eerste vier infecties worden gediagnosticeerd met PCR. En om de aanwezigheid van het immunodeficiëntievirus te bepalen door uitstrijkje met hoge nauwkeurigheid is onmogelijk. U moet een bloedtest ondergaan.

    Hoe zich voor te bereiden op de analyse en wanneer dit nodig is

    Een arts neemt een uitstrijkje van een patiënt op een gynaecologische stoel (ongeacht of ze zwanger is of niet) met een speciale borstel of Volkmann's steriele lepel. Het doet helemaal geen pijn en heel snel.

    Het is technisch mogelijk om een ​​goede, zelfs perfecte uitstrijk te bereiken als u bijvoorbeeld uw vagina reinigt met chloorhexidine of miramistine. Maar wat heeft het voor zin?

    • douche;
    • seks hebben;
    • gebruik vaginale hygiëneproducten, intieme deodoranten en medicijnen als ze niet zijn voorgeschreven door een arts;
    • doe een echo met een vaginale sonde;
    • ondergaan colposcopie.
    • voordat je een gynaecoloog of een laboratorium bezoekt, gedurende 3 uur, moet je niet plassen.

    Het geven van beroertes moet menstrueel bloeden. Zelfs als er op de laatste dag van de menstruatie gewoon een "beklag" is, is het beter om de studie uit te stellen, omdat het resultaat waarschijnlijk slecht zal zijn - een groot aantal leukocyten zal worden onthuld.

    Wat alcoholgebruik betreft, is niet verboden.

    Kan ik een uitstrijkje nemen tijdens het gebruik van antibiotica of onmiddellijk na de behandeling? Het is onwenselijk om dit te doen binnen 10 dagen na het gebruik van de lokale werking van geneesmiddelen (vaginaal) en een maand na orale inname van antibacteriële middelen.

    Voorgeschreven microscopisch onderzoek:

    • routinematig bij een bezoek aan een gynaecoloog;
    • bij opname in het gynaecologisch ziekenhuis;
    • voor IVF;
    • tijdens de zwangerschap (vooral als een uitstrijkje vaak slecht is);
    • als er klachten zijn: ongewone ontlading, jeuk, bekkenpijn, etc.

    Interpretatie van de resultaten: wat de norm te overwegen, en wat - pathologie in de microflora

    Om te beginnen, brengen wij onder uw aandacht een tabel waarin de indicatoren van de zogenaamde eerste graad van zuiverheid worden weergegeven. Er is geen melding gemaakt van de urethra erin (hoewel het materiaal ook van daar is genomen), omdat we het hebben over gynaecologische ziekten. Het ontstekingsproces in de urethra wordt behandeld door een uroloog.

    Epithelium - het aantal epitheelcellen wordt niet meegeteld, omdat het geen diagnostische waarde heeft. Maar te weinig van het epithelium spreekt van een atrofisch type uitstrijkje - het gebeurt bij vrouwen tijdens de menopauze.

    Leukocyten - worden beschouwd in het "gezichtsveld":

    • niet meer dan 10 - een kleine hoeveelheid;
    • 10-15 - matige hoeveelheid;
    • 30-50 - een groot aantal, de vrouw ziet de pathologische symptomen op, en de arts tijdens de inspectie diagnosticeert het ontstekingsproces in de vagina en (of) op de baarmoederhals.

    Mucus (strengen van slijm) - normaal zou aanwezig moeten zijn, maar een groot deel van het gebeurt met een ontsteking. In de urethra zou slijm niet moeten zijn.

    Bacteriële flora of gr-lactomorfotypen - de norm, het is de bescherming van de vagina tegen ziektekiemen.

    Trichomonas, gonokokken en sleutelcellen in een gezonde vrouw in de baarmoederhals en de vagina zouden dat niet moeten zijn. Candida is ook afwezig. Ten minste in een significante hoeveelheid, die wordt gedetecteerd in de analyse van de flora.

    Geschiktheid uitstrijkje is niet groot. Maar als een vrouw het ziekenhuis binnenkomt, nemen zij daar bij het eerste onderzoek in de stoel haar nieuw recht af.

    Meestal zijn de resultaten 7-14 dagen geldig. Daarom, als je het moet doorgeven vóór de operatie, doe het dan 3 dagen voor de opname in het ziekenhuis. De laatste van de toegewezen tests.

    Wat is te vinden in bacposseve

    De gynaecoloog zal het resultaat van het culturele onderzoek het allerbeste kunnen ontcijferen. Maar jijzelf, als je de informatie hieronder leest, zoek voorlopig je analyse uit.

    Het aantal micro-organismen kan worden uitgedrukt door "kruisen":

    • "+" Is een kleine hoeveelheid;
    • "++" is een bescheiden hoeveelheid;
    • "+++" is een groot aantal;
    • "++++" - overvloedige flora.

    Maar vaker wordt het aantal microfloravertegenwoordigers uitgedrukt in graden. Bijvoorbeeld: Klebsiella: 10 tot 4 graden. Trouwens, dit is een van de vertegenwoordigers van enterobacteriën. Gram-negatieve staaf, aëroob micro-organisme. Een van de gevaarlijkste pathogenen, hoewel het alleen maar opportunistisch is. Dit komt omdat Klebsiella resistent (resistent) is voor de meeste antibacteriële middelen.

    Hieronder beschrijven we andere veelvoorkomende termen die worden gevonden in de resultaten van een onderzoek of die u kunt horen van een arts.

    Soor - is candida of op een andere manier - spruw. Het wordt behandeld met antimycotische (antischimmel) geneesmiddelen.

    Gistachtige schimmels blastosporen en pseudomycelium - candidiasis of een andere schimmelziekte, meestal op dezelfde manier behandeld als spruw.

    Difteroïden - conditioneel pathogene micro-organismen, volgens de resultaten van onderzoek door wetenschappers, bij de meeste vrouwen is ongeveer 10% van de microflora zij, evenals streptokokken, stafylokokken, E. coli, gardnerella. Als de flora wordt verstoord, neemt hun aantal toe.

    Leptotrix is ​​een anaërobe gramnegatieve bacterie die leptotrichose veroorzaakt. Lees er meer over in dit artikel.

    Gemengde flora is een variant van de norm, als er geen symptomen van de ziekte zijn, volledig leukocyten of hun sterke toename (40-60-100). 15-20 is een variant van de norm, vooral tijdens de zwangerschap.

    Enterokokken (Enterococcus) zijn vertegenwoordigers van de darmmicroflora, die soms in de vagina terechtkomen. Gram-positieve cocci. Over enterococcus fecalis (Enterococcus faecalis) schreven we eerder. Er is ook enterococcus coli - E. coli. Meestal onaangename symptomen veroorzaken bij een concentratie boven de 10 in 4 graden.

    Pseudomonas aeruginosa is een gramnegatieve bacterie. Heeft vaak invloed op mensen met een lage immuniteit. Het heeft een goede weerstand tegen antibiotica, wat het behandelingsproces bemoeilijkt.

    Polymorfe bacillus is een veel voorkomende vertegenwoordiger van de vaginale biocenose. Als het aantal leukocyten normaal is en er zijn geen klachten, moet de aanwezigheid ervan niet storend zijn.

    Erytrocyten - kan in kleine hoeveelheden in een uitstrijkje zitten, vooral als het werd ingenomen tijdens het ontstekingsproces of wanneer er een kleine spotting was.

    Coccus of coccobacteriële flora - meestal tijdens een infectieus proces in de vagina of op de cervix. Als een vrouw klachten heeft, is antibacteriële behandeling nodig - vaginaal debridement.

    Diplococci is een type van bacteriën (cocci). Breng in een kleine hoeveelheid geen schade aan. Met uitzondering van gonokokkov - pathogenen gonorrhea. Ze wordt altijd behandeld.

    En tot slot zullen we frequente afkortingen noemen die geschreven zijn op de blanco van de analyseresultaten:

    • L - leukocyten;
    • Ep - epitheel;
    • Pl. ep. - squamous epitheel;
    • Gn (gn) -monococcus, de veroorzaker van gonorroe;
    • Trich - trichomonas, de veroorzaker van trichomoniasis.

    Per gram uitstrijkje

    Biologie en geneeskunde

    Afhankelijk van de structuur van de celwand, zijn prokaryoten die tot eubacteriën behoren, verdeeld in twee grote groepen. Er werd gevonden dat als gefixeerde eubacteriecellen eerst werden behandeld met kristalviolet en dan met jodium, een gekleurd complex werd gevormd. Bij de daaropvolgende behandeling met alcohol is, afhankelijk van de structuur van de celwand, het lot van het complex anders: in de zogenaamde gram-positieve soorten wordt dit complex door de cel vastgehouden, en de laatste blijft gekleurd, in gram-negatieve soorten, integendeel, het geverfde complex wordt uit de cellen gewassen en zij worden verkleurd. (Deze methode werd voor het eerst voorgesteld in 1884 door de Deense wetenschapper H. Gram (Hoofdstuk Gram), die betrokken was bij het verven van weefsels, later werd het gebruikt voor bacteriën).

    In sommige eubacteriën is een positieve reactie bij het kleuren op de hierboven beschreven manier alleen karakteristiek voor cellen die zich in het stadium van actieve groei bevinden. Er werd gevonden dat het geverfde complex wordt gevormd op de protoplast, maar de retentie ervan door de cel of het uitlogen daarvan tijdens latere verwerking met alcohol wordt bepaald door de structurele kenmerken van de celwand.

    Kleuring van geneesmiddelen verhoogt de gevoeligheid van microscopie, omdat ongekleurde bacteriën slecht onderscheiden kunnen worden, zelfs met een toename van 400-1000.

    Differentiaal Gram-kleuring is de meest voorkomende, hoewel monochrome kleuring ook wordt gebruikt. Gram-kleuring maakt het mogelijk om bacteriën te onderscheiden waarvan de dikke celwand vrijwel volledig bestaat uit peptidoglycaan (grampositief) van bacteriën waarvan de celwand, naast een dunne laag peptidoglycaan, een buitenmembraan heeft dat bestaat uit lipoproteïnen en lipopolysacchariden (gramnegatief). De hoofdkleurstof (bijvoorbeeld kristalviolet) is stevig gefixeerd in de wand van gram-positieve bacteriën, waardoor ze een blauwzwarte kleur krijgen en gemakkelijk worden uitgewassen met alcohol (of aceton) uit de wand van gramnegatieve bacteriën, waarna ze worden geverfd met een contrasterende kleurstof (bijv. Safranin) in rood.

    Gram-kleuring is onmisbaar bij de studie van sputum-uitstrijkjes. Als het sputum correct wordt ontvangen, worden bij een kleine vergroting ten minste 25 neutrofielen en minder dan 10 epitheelcellen in het gezichtsveld gezien. Een groter aantal epitheelcellen en een verscheidenheid aan soorten bacteriën geven aan dat het sputum is verontreinigd met de inhoud van de orofarynx. Hoewel het vaak moeilijk is om normale microflora van pathogene bacteriën te onderscheiden, geven de vlekvlekken van Gram waardevolle informatie als de pathogene bacterie enige indicatie tot haar heeft (biologisch signaal). In bacteriële vaginose zijn bijvoorbeeld epitheliale cellen bezaaid met gram-positieve bacteriën zichtbaar in een vaginaal uitstrijkje.

    Microscopie van uitwerpselen smeert met gram gekleurd, gebruikt als screeningonderzoek. Wanneer neutrofielen worden gedetecteerd, beginnen ze met bacteriologisch onderzoek en de bepaling van toxines geproduceerd door Clostridium difficile.

    Gramkleuring wordt ook gebruikt voor het identificeren van bacteriën en leukocyten in de liquor, synoviale, pleurale en peritoneale vloeistoffen. De ondergrens van gevoeligheid van de methode is 10.000 bacteriën per 1 ml.

    Om de gevoeligheid te verhogen, wordt de testvloeistof gecentrifugeerd en wordt een gekleurd uitstrijkje gemaakt. Deze procedure wordt verrijkingsmateriaal genoemd. Het is eenvoudig en vooral waardevol voor het opsporen van bacteriën en witte bloedcellen in CSF en zuurbestendige bacteriën in sputum.

    referenties:

    Methoden van algemene bacteriologie

    De techniek van het schilderen van uitstrijkjes. Gebruik voor verven van verfoplossingen of inktpapier, zoals voorgesteld door A.I. Blue. Een gemakkelijke voorbereiding, gebruiksgemak en de mogelijkheid om voor onbepaalde tijd inktpapier op te slaan, vormden de basis voor hun brede gebruik in verschillende kleurmethoden.

    Kleurplaten schilderen met papier. Een paar druppels water worden aangebracht op het gedroogde en gefixeerde preparaat, er worden gekleurd papier van 22 cm aangebracht.Tijdens de gehele verfperiode moet het papier nat blijven en stevig hechten aan het glasoppervlak. Bij het drogen wordt het papier bovendien bevochtigd met water. De duur van de vlekkleuring wordt bepaald door de kleuringsmethode. Aan het einde van het verven wordt het papier zorgvuldig verwijderd met een tang en wordt het uitstrijkje gewassen met leidingwater en gedroogd in lucht of filtreerpapier.

    Vlekken vlekken met kleurstofoplossingen. Kleurstof wordt aangebracht op het gedroogde en gefixeerde preparaat met een pipet in een zodanige hoeveelheid dat het de gehele uitstrijk bedekt. Wanneer uitstrijkjes worden gekleurd met geconcentreerde oplossingen van kleurstoffen (Zielya's carbolische fuchsine, carbolische gentiaan of kristalviolet), worden ze gekleurd door filterpapier dat de kleurstofdeeltjes vasthoudt: een strook filterpapier wordt op een vaste vlek aangebracht en de kleurstofoplossing wordt erop gegoten.

    Voor microscopisch onderzoek worden bereide uitstrijkjes, gedroogd en gefixeerd, aan kleuring onderworpen. Kleuren is eenvoudig en complex. Eenvoudig kleuren bestaat uit het aanbrengen van een enkele verf op een slag gedurende een bepaalde tijdsperiode. Meestal wordt eenvoudige waterverf gebruikt alcohol-water (1:10) Pfeiffer fuchsin, Leffler methylene blue en safranin. Eosine, als een zure kleurstof, wordt alleen gebruikt om het cytoplasma van cellen te kleuren en om de achtergrond te kleuren. Zuur magenta is volledig ongeschikt voor het kleuren van bacteriën.

    Met eenvoudige kleuring zien microbiële lichamen de kleur van de kleurstof die zo intens wordt gebruikt als de celkernen; tegelijkertijd worden het cytoplasma en de gehele achtergrond van het uitstrijkje (als het geen uitstrijkje is van een zuivere cultuur) in dezelfde kleur geverfd, maar iets bleker. Fuchsin en gentiaan violet zijn intensere verven; methyleenblauw vlekken veel bleker. De perceptie van kleur hangt niet alleen af ​​van de eigenschappen van verf, maar ook van de eigenschappen van de te kleuren microben. De meeste microben worden gemakkelijk en snel gekleurd met water of alcohol-waterige oplossingen van verven.

    Voor hardkleurende microben (bijvoorbeeld de veroorzaker van tuberculose) of hun onderdelen (sporen, flagellen, enz.) Moeten intensievere (geforceerde) kleuringsmethoden worden toegepast.

    Het is mogelijk om de kleuring te forceren: a) door het kleuringvermogen van de basisverven te vergroten, b) door de kleuringstermijn te verlengen en c) door de werking van augurken.

    Om het kleurend vermogen te vergroten, wordt de verf blootgesteld aan hoge temperatuur (verwarming) totdat damp verschijnt (zelfs koken). Door de mate van verwarming te variëren, is het mogelijk om verschillende graden van kleursterkte te verkrijgen.

    Verlenging van het effect van de kleuroplossing op een voorwerp kan ook tot op zekere hoogte de mate van kleuring verbeteren.

    Meurants zijn stoffen die de penetratie van kleurstof in cellen vergemakkelijken: fenol, tannine, azijnzuur en chroomzuren, alkaliën, enz. Het werkingsmechanisme van beitelingen is anders: in sommige gevallen werken beitsen op kleurstoffen, in andere op het vermogen van cellen om waarneming te kleuren. De beitsen werken op het uitstrijkje vóór de werking van de verf (bijvoorbeeld bij het inkleuren van de flagella), of samen met de verf (fenol in Tsili fuchsin), of na de werking van de verf (Lyugolevsky-oplossing in de Gram-methode).

    Bij het verven van uitstrijkjes worden naast verven ook zogenaamde blekende of kleurende stoffen gebruikt. Deze laatste dienen om overtollige verf uit de hele microbiële cel of uit een deel ervan te verwijderen wanneer de verf te krachtig is in het adsorberen van het materiaal of wanneer het opnieuw wordt gebrand met behulp van warmte, enz.

    Als bleekmiddelen worden alcohol gebruikt: alcohol, 5% waterige oplossing van zwavelzuur, 20-30% waterige oplossing van salpeterzuur, 3% oplossing van zoutzuur in absolute alcohol, enz.

    Om vegen te verven is het noodzakelijk om op het bureaublad een set kleuroplossingen in flessen (beter dan oranje glas) met pipetten en rubberen blikken te hebben. Flesjes moeten worden geëtiketteerd met de juiste benamingen; Om snelle vervuiling met verflabels te voorkomen, is het aan te bevelen deze in te smeren met gesmolten paraffine (met een borstel). Flesjes verf worden in een houten statiefblok geplaatst (fig. 2).

    Fig. 2. Flessen voor verven

    Voor het afwassen van verf en spoeluitsparingen is een fles met een buis op een standaard voor gedestilleerd water en een gietvorm (afvoerbeker) met een steunbrug voor uitstrijkjes nodig. De brugstandaard bestaat uit twee glazen buizen of stokken verbonden aan de uiteinden met stukjes rubberen buis. De breedte van de standaard moet kleiner zijn dan de lengte van de dia. Bovendien zijn een alcohol (of gas) brander en een Cornet-pincet voor microscoopglaasjes vereist voor het smeren. Bij het verven met verwarming wordt de glasplaat gegrepen met een pincet en gedurende een bepaalde tijd boven de vlam gehouden. In het geval van langdurige kleuring, gebruiken ze cuvettes of kleine kopjes, waar ze verf gieten en dompelen erin. Wanneer u tegelijkertijd meerdere uitstrijkjes in de cuvette schildert, om te voorkomen dat de glazen aan elkaar plakken, worden ze in twee met de afgeveegde zijde verbonden en versterkt met rubberen ringen die uit de buizen gesneden zijn. Na het kleuren worden de swabs gewassen met water en grondig gedroogd met filtreerpapier.

    Het werk van de afgelopen jaren heeft de mogelijkheid onthuld om de levensvatbaarheid van microben, voornamelijk spore-dragende, tijdens het kleuren te behouden. Daarom is een voldoende fixatie van de slagen noodzakelijk. Waswater (indien bevlekt) moet in een speciaal vat worden afgetapt, gevolgd door neutralisatie. Het afgewerkte filtreerpapier (na het drogen van de uitstrijkjes) mag niet worden weggegooid, maar moet worden verbrand en de gebruikte uitstrijkjes moeten worden gedesinfecteerd.

    Eenvoudige methoden om vegen te verven

    Met een eenvoudige verfmethode worden een paar druppels alcohol-water of waterige verfoplossing gedurende 1-2 minuten op een vaste uitstrijking gegoten; Fuchsin (1:10) of Leffler-methyleenblauw worden meestal voor dit doel gebruikt. Vervolgens wordt de verf afgewassen met gedestilleerd water en wordt het uitstrijkje gedroogd tussen twee stroken filtreerpapier. Meestal fuchsin (1:10) kleur 10-30 seconden, en methyleenblauw - 2-10 minuten. Fuchsin-vlekken smeren intensiever, en wanneer ze worden gekleurd met methyleenblauw, worden zachte, elegantere bereidingen verkregen. Het uitstrijkje na het drogen met filterpapier moet volledig droog zijn, anders zal het resterende vocht in contact komen met cederolie, een emulsie vormen en microscopie tot een obscuur beeld leiden. Over het algemeen hangt de duur van de kleuring af van het type en de kwaliteit van de kleuring, de mate van gevoeligheid van de microbe voor kleuring en de dikte van het uitstrijkje.

    Kleurplaten door Muromtsev

    Bereid twee oplossingen voor:

    Carbolzuur (kristallijn)

    Nadat de verf is opgelost, worden beide oplossingen gemengd en gefilterd door een papieren filter. Verf blijft nog lang hangen. Uitstrijkjes worden gedurende 15 tot 30 seconden door filtreerpapierstroken geverfd.

    Na fixatie van uitstrijkjes beveelt de auteur aan om gedurende 3-10 minuten een mengsel van alcohol (80 delen) met formaline (20 delen) te produceren.

    Met deze vlekkenvlekken in microbiële cellen worden insluitsels, bipolariteit, capsules en sporen gedetecteerd. De methode is geschikt voor het kleuren van uitstrijkjes van organen, bloed, kweken op media met natuurlijk eiwit en op halfvloeibare agar.

    De achtergrond van het medicijn van deze substraten is roze; weefselcellen en microbiële lichamen zijn geschilderd in blauwachtig blauwe kleur.

    Moeilijke (differentiële) vlekkleuring methoden

    Gecompliceerde kleuringmethoden zijn gebaseerd op de karakteristieken van de fysisch-chemische structuur van de microbiële cel. De essentie van deze methoden ligt in de impact op de uitstrijk van twee kleurstoffen, waarvan er een de belangrijkste (hoofd) verf is, en de andere - extra (contrast). Na blootstelling aan de eerste verf is het uitstrijkje verkleurd en pas daarna wordt het opnieuw gekleurd. Een aantal chemische reagentia (zuren, alkaliën, alcohol, aceton, enz.) Kunnen als bleekmiddelen worden gebruikt. Het uitstrijken van het uitstrijkje met gewoon water is ook een zuiver mechanisch bleekproces, maar dit vereist een lange tijd; bovendien is de verkleuring onvolledig. Met betrekking tot bleekmiddelen kunnen microben gemakkelijk in groepen worden verdeeld en moeilijk te bleken. Niet alle soorten microben zijn even relevant voor bleekmiddelen; sommige zijn zuur- en alcoholbestendig, andere zijn alleen zuurbestendig. Tenslotte, sommige, bijvoorbeeld, sporen, verzetten zich krachtig tegen de effecten van alle bleekmiddelen en behoren tot de groep van verfbestendige.

    Complexe kleuringmethoden hebben een belangrijke differentiële diagnostische waarde voor het karakteriseren van de onderzochte microbe.

    Gram-kleuring

    Bij het verwerken van uitstrijkjes (secties) uit organen en weefsels die micro-organismen, gentiaanviolet en dan jodium bevatten, heeft het preparaat, in het zwart geverfd, de eigenschap te bleken onder invloed van alcohol. Tegelijkertijd worden sommige van de bacteriën in het uitstrijkje ook verkleurd, terwijl andere paars worden. Met extra kleurstoffen (in het bijzonder met Pfeiffer's Fuchsin) zijn bacteriën die ontkleurd zijn met alcohol rood (gramnegatief) gekleurd. Anderen die de violette kleur (jodium + gentiaanvioletverbinding), die niet gebleekt is met alcohol, stevig behouden, behoren tot de groep van gram-positieve bacteriën. Het verschil tussen gram-positieve en gram-negatieve bacteriën hangt af van het verschil in hun iso-elektrische punten en het vermogen van gram-positieve bacteriën om kleur te behouden is geassocieerd met de aanwezigheid van het magnesiumzout van ribonucleïnezuur, dat gram-negatieve bacteriën niet bevatten. Het beste van alles is dat de Gram-kleuring wordt verkregen nadat de uitstrijkjes zijn gefixeerd door een fysische methode (verwarming). De karakteristieken van de houding van bepaalde soorten bacteriën tegen verschillende verven, in het bijzonder kleuring volgens de Gram-methode, worden gekenmerkt door de zogenaamde tinteriële eigenschappen van microben.

    Kleurtechniek. Een uitstrijkje van filtreerpapier van iets kleiner formaat en een dia wordt geplaatst op een uitstrijkje dat is gefixeerd met warmte; Vervolgens wordt de verf afgetapt, wordt een strook filtreerpapier verwijderd en, zonder te wassen met water, wordt de Lugol-oplossing gedurende 1-2 minuten op het uitstrijkje gegoten. De oplossing wordt gedraineerd en ontkleurt het geneesmiddel gedurende 30-60 seconden in 96 ° alcohol, wordt met water gewassen en gekleurd met Pfeiffer's Fuchsin (of verdund met safranine, neutralula of vesuvine) gedurende 2-3 minuten. Vervolgens wordt de verf afgewassen met water en wordt het uitstrijkje gedroogd met een schoon filtreerpapier.

    Microscopisch beeld: als Gram-uitstrijkjes correct zijn gekleurd, worden gram-positieve microben donkerpaars en gramnegatieve kleuren worden gekleurd als aanvullende verf (bijvoorbeeld Pfeiffer's roze kleur van fuchsin fuchsin).

    Gebruik geen vervuild filterpapier: mechanische overdracht van microben van het ene naar het andere uitstrijkje is mogelijk, wat de resultaten van microscopie kan beïnvloeden. De duur van blootstelling aan verf, Lugol-oplossing (bijtmiddel) en alcohol hangt af van de dikte van het uitstrijkje. Vooral het cruciale punt in de gramkleuring is de verkleuring van het uitstrijkje met alcohol. Bij een korte blootstelling aan alcohol worden opnieuw geverfde preparaten verkregen en bij langdurige blootstelling zullen alle microben (inclusief p-positief) verkleuren. Op een dik, dik uitstrijkje (bijvoorbeeld uit een agarcultuur) moet de blootstelling aan alcohol langer zijn dan een dunne uitstrijk, vooral uit vloeibare culturen. Wanneer blootgesteld aan alcohol op een ongelijk bereid uitstrijkje in zijn dikke delen, bleven de microben niet-verkleurd en in dunne verkleuren ze; je krijgt een "bonte" kleurpatroon, wat tot verkeerde conclusies kan leiden.

    Soms kunnen gram-negatieve bacteriën worden waargenomen in de kweek van gram-positieve bacteriën, die des te groter is, hoe ouder de populatie. Dit is niets meer dan bacteriële lijken die intracellulaire autolyse hebben ondergaan, waardoor de cel magnesium-ribonucleinaten heeft verloren. Aan de andere kant, in zeer jonge culturen (enkele uren groei) van de familie van enterobacteriën, zijn gigantische, juveniele vormen van deze bacteriën, die 2-3 keer groter zijn dan volwassenen (18 uur), zeer basofiel doordat hun cytoplasma wordt overladen met ribonucleinaten. Daarom worden ze bij het kleuren op Gram zo intens gekleurd met magenta dat ze bij slecht licht als grampositieve vegetatieve vormen van spore-stokjes kunnen worden genomen.

    Voor beginners, maar ook in twijfelgevallen, is het raadzaam om controlepreparaten te bereiden op hetzelfde glas waar de testvlek zich bevindt, een uit een microbencultuur, uiteraard grampositief, en een uit gramnegatieve.

    Wanneer de verkleuring van het medicijn in gram-gekleurde alcohol direct op het uitstrijkje kan worden gegoten, schudt u het glas voortdurend. Het is beter om de verkleuring in cuvettes uit te voeren waar alcohol wordt gegoten en met het pincet van Cornet wordt het medicijn opgetild en neergelaten, waarbij de kleur van de alcohol die uit het glas stroomt wordt waargenomen. De verkleuring wordt als voltooid beschouwd wanneer de druppels alcohol die uit het uitstrijkje stromen gelijk worden in kleur met de alcohol in de cuvette; meestal duurt het 10-30 seconden, afhankelijk van de dikte van de streek.

    Alcohol 96 ° in cuvettes moet vaker worden vervangen (80 ° alcohol onderscheidt het uitstrijkje niet goed). Gebruikte alcohol wordt meestal uit cuvettes in alcoholbranders gegoten.

    Voor beginners kan een verkleuring van uitstrijkjes met gejodeerde alcohol worden aanbevolen. Er is vastgesteld dat als een kleine jodiumtinctuur wordt toegevoegd aan de ontkleuringsvloeistof, microben, die gram-positief zijn gekleurd, niet verkleuren in een dergelijke vloeistof, zelfs gedurende een uur, en gramnegatieve kleuren worden gekleurd in ongeveer 5 seconden. Volgens Savateev is het voldoende om 2-4 ml 10% jodiumtinctuur per 100 ml 95 ° -alcohol toe te voegen; de oplossing kan nog lang aanhouden. Als aceton wordt gebruikt in plaats van alcohol, wordt jodiumtinctuur vóór gebruik toegevoegd.

    Twee minuten is voldoende voor het verkleuren van uitstrijkjes met gejodeerde alcohol, gevolgd door wassen met water en extra Pfeiffer-fuchsinekleuring.

    De kleurmethode van Gram aanpassen

    Zoals hierboven vermeld, is de Gram-kleuring de belangrijkste methode voor het identificeren van bacteriën. Het is theoretisch mogelijk om bacteriën in twee groepen te verdelen: grampositief en gramnegatief; in werkelijkheid zijn er gevallen waarin dezelfde bacteriën worden gekenmerkt als "gram-selecteerbaar". Aangezien de methode voor het eerst werd ontwikkeld door Christian Gram in 1884, zijn er talrijke Gram-kleurmodificaties gepubliceerd. Een uitstrijkje van bacteriën voor kleuring op een glasplaatje wordt verkregen door een directe methode uit een kweek op een vloeibaar of vast medium, maar het is het beste om het te bereiden uit een formaline gefixeerd, gewassen monster. Een paar extra minuten besteed aan het suspenderen van bacteriën in 5% (v / v) formaline, verzamelen en wassen door centrifugeren, betalen af ​​omdat celgrootte en -vorm goed worden bewaard, cellen gelijkmatig worden gekleurd en willekeurig verspreide precipitaten uit vloeibare kweekmedia ontbreken. In elk geval wordt aanbevolen het uitstrijkje in de lucht te drogen en het te fixeren door het te verwarmen, net als bij een eenvoudige verving. Het is belangrijk om de gramkleurmethode te standaardiseren. Vergelijkbare resultaten geven nog twee manieren om te kleuren - in de modificatie van Hooker en in de aanpassing van Burke.

    Gramkleuring in een modificatie van Hooker.

    Oplossing A voor de bereiding van het kleuringsreagens:

    Kristalviolet (met een drogestofgehalte van 90%)

    Ethanol 95% (v / v)

    Oplossing B voor de bereiding van het kleuringsreagens:

    Oplossingen A en B worden gemengd om kristalvioletkleuring reagens te verkrijgen. Laat het 24 uur staan ​​en gebruik filterpapier voordat u het filter gebruikt.

    Jodium en kaliumjodide worden vermalen in een mortier en water wordt langzaam toegevoegd met continu malen totdat het jodium is opgelost. Bewaren in een donkere kolf.

    Oplosmiddel voor bleken:

    Ethanol 95% (v / v)

    Safranin O [2,5% (w / v) 95% (v / v) ethanol]

    Een aan de lucht gedroogd, bacterieel uitstrijkje dat in hitte is uitgesmeerd, wordt gedurende 1 minuut ondergedompeld in een kristalviolette kleuroplossing.

    Het uitstrijkje wordt gedurende 2 seconden gewassen in een zwakke, gehoekte straal kraanwater.

    Het uitstrijkje wordt gedurende 1 minuut in jodium-bijtmiddel geplaatst.

    Het wordt in een zwakke toestand gewassen, loopt gedurende 2 seconden onder een hoekstroom leidingwater, waarna het wordt gedroogd met vloeipapier.

    Dompel het uitstrijkje gedurende 30 seconden in 95% ethanol, schud de laatste, waarna het uitstrijkje wordt gedroogd met vloeipapier.

    Dompel het uitstrijkje gedurende 10 seconden onder in een extra kleurstof.

    Het uitstrijkje wordt gewassen in een zwakke, hoekige straal leidingwater totdat de kleur in de afvoer is verdwenen, waarna het wordt gedroogd met vloeipapier.

    Gram-kleuring in de Burke-modificatie.

    Kristalviolet (met een drogestofgehalte van 90%)

    Mordant bereid op dezelfde manier als voor de wijziging van Hooker.

    Oplosmiddel voor verkleuring: (voorzichtigheid, ontvlambaar!)

    Safranin O (met een drogestofgehalte van 85%)

    Het uitstrijkje, gedroogd aan de lucht en gefixeerd door verhitting, wordt ondergedompeld in oplossing A, 2-3 druppels oplossing B worden toegevoegd en gedurende 2 minuten geïncubeerd.

    Was het uitstrijkje met jodium beits en bedek het dan 2 minuten met een nieuw bijtmiddel.

    Het wattenstaafje wordt gedurende 2 seconden in een zwakke, gehoekte stroom water uit de kraan gewassen. Het oppervlak rond het uitstrijkje wordt gedroogd met vloeipapier, maar het uitstrijkje wordt beschermd tegen uitdrogen.

    Een ontkleuringsoplosmiddel wordt druppelsgewijs aangebracht op een uitstrijkje met een gekantelde glasplaat totdat de kleur verdwijnt uit het oplosmiddel dat uit het glas stroomt. Daarna wordt het uitstrijkje aan de lucht gedroogd.

    De Gram-methode is dit. Wat is de Gram-methode?

    De Gram-methode is een methode voor het kleuren van micro-organismen voor onderzoek dat differentiatie van bacteriën mogelijk maakt volgens de biochemische eigenschappen van hun celwand. Het werd in 1884 voorgesteld door de Deense arts G.K. Gram.

    Gram-bacteriën gekleurd met aniline kleurstoffen - gentiaan of methyl violet, enz., Dan is de kleurstof gefixeerd met een oplossing van jodium. Tijdens het daaropvolgende wassen van het gekleurde medicijn met alcohol, worden die soorten bacteriën die stevig zijn gekleurd, gram-positieve bacteriën genoemd (aangeduid met Gram (+)), in tegenstelling tot gram-negatieve bacteriën (Gram (-)), die verkleuren bij wassen.

    Gebruik in diagnostiek

    Gramkleuring is van groot belang in de systematiek van bacteriën, evenals voor de microbiologische diagnose van infectieziekten.

    Gram-positieve cocci (behalve voor vertegenwoordigers van het geslacht Neisseria) en sporiferische vormen van bacteriën, evenals gist, ze zijn geverfd in een blauwzwarte (donkerblauwe) kleur.

    Veel vage bacteriën zijn gramnegatief, ze worden rood, de celkernen worden helderrood en het cytoplasma is roze of karmozijnrood.

    Kleurtechniek

    Gram-kleuring verwijst naar een complexe kleuringswerkwijze wanneer een uitstrijkje wordt beïnvloed door twee kleurstoffen, waarvan er één de hoofd- en de andere kleurstof is. Naast kleurstoffen worden bleekmiddelen gebruikt voor complexe kleurmethoden: alcohol, zuren, enz.

    Gram-kleuringen gebruiken vaak anilinekleurstoffen van de trifenylmethaangroep: gentiaan, methylviolet of kristalviolet. Gram-positieve Gram (+) micro-organismen geven een sterke verbinding met deze kleurstoffen en jodium. Tegelijkertijd verkleuren ze niet bij blootstelling aan alcohol, waardoor bij extra kleuring met Fuchsin Gram (+) micro-organismen de oorspronkelijk aangenomen paarse kleur niet veranderen.

    Gram-negatieve Gram (-) micro-organismen vormen een verbinding met basische kleurstoffen en jodium die gemakkelijk wordt vernietigd door de werking van alcohol. Dientengevolge worden de microben verkleurd en vervolgens gekleurd met magenta, waardoor een rode kleur wordt verkregen.

    Materiaalvoorbereiding voor schilderen

    Het testmateriaal wordt in een dunne laag verdeeld over het oppervlak van een goed ontvet dia. De bereide uitstrijk wordt aan de lucht gedroogd en na volledige droging gefixeerd. Histologische secties worden bereid door een routinematige techniek, het fixeren van stukjes weefsel in formaline en gieten in paraffine.

    bevestiging

    Bij het fixeren wordt het uitstrijkje op het oppervlak van de schuif gefixeerd en daarom worden de microbiële cellen niet afgewassen tijdens de daaropvolgende kleuring van het preparaat. Bovendien kleuren dode microbiële cellen beter dan levende cellen.

    Er is een fysieke fixatiemethode, die is gebaseerd op het effect van hoge temperaturen op de microbiële cel en chemische methoden waarbij chemicaliën worden gebruikt die coagulatie van cytoplasmatische eiwitten veroorzaken.

    Fysieke fixatiemethode

    Een glasplaatje met een preparaat wordt met een pincet of I en II vingers van de rechterhand bij de randen genomen met een borstel naar boven en met een vloeiende beweging worden ze 2-3 keer uitgevoerd over het bovenste deel van de brandervlam. Het hele fixatieproces duurt niet langer dan 2 seconden.

    De betrouwbaarheid van de fixatie wordt gecontroleerd door de volgende methode: het vlekvrije oppervlak van de schuif wordt aangebracht op het achteroppervlak van de linkerhand. Als het uitstrijkje correct is gefixeerd, moet het glas heet zijn, maar geen branderig gevoel veroorzaken (70-80 ° C).

    Chemische methode van fixatie

    Methylalcohol, aceton, een mengsel van Nikiforov (een mengsel van ethylalcohol 96% en anestheticumether in de verhouding 1: 1), Karnua-vloeistof (ethylalcohol 96% - 60%, chloroform 30%, ijsazijn 10%), alcohol -vorm (40% formaline 5 ml, ethylalcohol 96 ° - 95 ml). Een glasplaat met gedroogde uitstrijk wordt ondergedompeld in een kolf met een fixerende substantie gedurende 10-15 minuten en vervolgens aan de lucht gedroogd. Fixatie in paren van 40% formaline gedurende enkele seconden wordt ook gebruikt.

    Smeer vlekken proces

    1. Op een vaste uitstrijk, giet een van de basische kleurstoffen gedurende 2-3 minuten. Om neerslag te voorkomen, wordt het gekleurd door filtreerpapier.
    2. Tap de verf af, verwijder voorzichtig het filterpapier. Een uitstrijkje wordt gegoten met een Lugol-oplossing of een jodide-oplossing volgens Gram (een waterige oplossing van kaliumjodide en kristallijn jodium in een 2: 1-verhouding) gedurende 1-2 minuten totdat de bereiding zwart is gemaakt.
    3. De oplossing wordt afgetapt, een spoeling wordt gespoeld met 96 ° ethylalcohol of aceton, uitgegoten en leeggemaakt totdat het uitstrijkje verkleurt en de drainagevloeistof helder is (ongeveer 20-40-60 seconden).
    4. Was het glas voorzichtig gedurende 1-2 minuten in stromend of gedistilleerd water.
    5. Om de gramnegatieve groep bacteriën te identificeren, worden de preparaten bovendien gekleurd met fuchsine of safranine (2-5 minuten).
    6. Gewassen in stromend water en gedroogd met filtreerpapier.

    Techniekkleuring van bacteriën in histologische coupes Gram-Weigert

    1. De van was ontdane delen worden aangepast aan water.
    2. Vlek 20 minuten in 1% oplossing van pararosaniline of basisch fuchsine in 1% azijnzuur (de kleurstofoplossing wordt verwarmd tot koken, gekoeld en gefilterd).
    3. Gewassen in 3 verschuivingen van gedestilleerd water.
    4. Verf 5 min in 1% kristalviolet in gedestilleerd water.
    5. Spoel snel in 1% natriumchlorideoplossing.
    6. Verwerkt gedurende 30 seconden in een mengsel: 1 deel jodium + 2 delen kaliumjodide + 100 delen gedestilleerd water.
    7. Blot met filtreerpapier.
    8. Differentieer, breng op de sectie een mengsel van gelijke volumes aniline en xyleen (1 - 2 ml) aan; de oplossingen worden leeggemaakt totdat de kleurstofwolken niet meer van de slice af bewegen.
    9. Uitgevoerd na 3 xyleenwisselingen.
    10. Omhuld in balsem of elke hars opgelost in xyleen.

    Resultaat: Gram-positieve bacteriën zijn blauwzwart, violet fibrine, kernen zijn rood.

    Zie ook

    • Kleuren van micro-organismen
    • Aniline kleurstoffen

    referenties

    In het Duits

    • Gram, HC (1884). "Über die isolate Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten". Fortschritte der Medizin 2: 185-89.

    In het Engels

    Microbiologische onderzoeksmethoden

    Het doel van microbiologisch onderzoek is het vaststellen van de etiologische rol van bepaalde micro-organismen in het geval van een ziekte of een klinisch syndroom. Er moet rekening worden gehouden met het feit dat de veroorzakers van ontstekingsprocessen van de voortplantingsorganen kunnen zijn als UPM - vertegenwoordigers van de tijdelijke component van de normale microflora van de vagina en andere biotopen, en absolute pathogenen - de veroorzakers van soa's. Een dergelijk verband tussen SOA's en opportunistische infecties (veroorzaakt door DMP) bepaalt de noodzaak van een geïntegreerde benadering van microbiologische diagnose.

    INDICATIES

    Microbiologische onderzoeksmethoden worden gebruikt om infectieuze ziekten te bevestigen of uit te sluiten.

    METHODOLOGIE

    REGELS VOOR HET GEBRUIK VAN KLINISCH MATERIAAL

    Afvoer uit de urethra wordt uitgevoerd met een plastic wegwerpbare steriele bacteriologische lus met een volume van 1 μl of een dun dacron-wattenstaafje op een aluminiumdraad. Pre-externe opening van de urethra moet worden schoongemaakt met een gaasje of wattenstaafje. Bij afwezigheid van zichtbare secreties kan de arts een lichte massage van de urethra uitvoeren. De tampon / lus wordt 1-2 cm in de urethra gestoken en verwijderd door licht op de zij- en achterwanden te drukken. Voor microscopische en immunofluorescentie-onderzoeken wordt het materiaal overgebracht op een glasplaatje door een tampon te rollen of een lus met een lichte druk eroverheen te bewegen. Voor kweken en PCR wordt het materiaal in buizen geplaatst met geschikte transportmedia.

    Uitwendige geslachtsdelen, de vooravond van de vagina: uitstrijkjes genomen met steriele katoen (Dacron) tampons van pathologisch veranderde gebieden; voor ontsteking van de grote klier van de vestibule wordt een punctie uitgevoerd; wanneer het abces wordt geopend, nemen de klieren pus met een steriel wattenstaafje.

    Vagina: na het inbrengen van de spiegel en de lift wordt de ontlading uitgevoerd met een steriel wattenstaafje van de posterior fornix of van pathologisch veranderde secties van het slijmvlies; voor kweekdoeleinden wordt het staafje in een steriele buis geplaatst en onmiddellijk naar het laboratorium gestuurd. Als niet aan deze eis kan worden voldaan, wordt het genomen monster in een reageerbuis met een transportmedium geplaatst.

    Voor microscopie wordt het genomen monster overgebracht op een glasplaatje, waarbij de tampon aan alle zijden van het glas wordt gerold, waarbij wordt geprobeerd het materiaal gelijkmatig te verdelen, waarbij de natuurlijke tussenplaatsing van alle componenten van de biocenose wordt behouden; het uitstrijkje wordt aan de lucht gedroogd, gefixeerd met 96% ethanoloplossing (2-3 druppels per uitstrijkje tot volledige verdamping), geëtiketteerd glas en in een gesloten verpakking naar het laboratorium gestuurd. Tijdens de cultuurdiagnose van trichomoniasis wordt de genomen ontlading onmiddellijk in een voedingsmedium geplaatst en naar het laboratorium getransporteerd.

    Cervix: nadat de baarmoederhals in de spiegels is blootgesteld, wordt het vaginale deel van de baarmoeder zorgvuldig behandeld met een wattenstaafje bevochtigd met steriele 0,9% natriumchloride-oplossing of water, waarna een standaard wattenstaafje voorzichtig in het cervicale kanaal wordt ingebracht, een ontlading neemt, de tampon verwijdert, zonder de vaginale wanden te raken, en plaats het in een reageerbuis met een transportmedium voor kweek. Om microscopie uit te voeren met immunofluorescentie methode in verschillende modificaties, virologisch onderzoek of PCR, wordt het materiaal genomen met een speciale borstel, die in het kanaal wordt ingebracht na het verwijderen van de slijmprop of het nemen van een monster voor kweek. Nadat de tamponborstel in het cervicale kanaal is ingebracht, wordt deze meerdere keren met 1-2 cm geroteerd om cellulair afschrapen te verkrijgen, maar scarification en bloedelementen op de tampon te vermijden. Het afgenomen materiaal wordt in reageerbuizen geplaatst met een geschikt transportmedium. Voor microscopische en immunofluorescentie-onderzoeken wordt het genomen monster onmiddellijk van het staafje naar een glasplaatje overgebracht.

    Baarmoeder: materiaal uit de baarmoeder voor onderzoek kan alleen worden verkregen door een speciaal hulpmiddel te gebruiken met een buitenste laag op de aspirator van de spuit. Neem de regels van asepsis in acht, passeer het cervicale kanaal en open in de baarmoeder het buitenmembraan van de spuit en zuig de inhoud op. Sluit vervolgens de buitenste schede en verwijder de sonde uit de baarmoeder.

    Baarmoederaanhechtingen: materiaal van de infectiebron kan alleen worden verkregen met chirurgische ingreep (pus, exsudaat, biopsiemateriaal) of tijdens diagnostische puncties van tumorachtige formaties in het bekken door de vaginale gewelven (denk aan de mogelijkheid van contaminatie van het monster met vaginale microflora). In sommige gevallen, als een plaats van infectie in de baarmoederaanhangsels in verbinding staat met de baarmoederholte, kunnen herhaalde onderzoeken van het cervicale kanaal nuttig zijn wanneer de resultaten van de studie van hetzelfde type zijn. Urine: na grondig spoelen van de uitwendige geslachtsorganen, wordt een gemiddeld deel van de ochtend vrijgemaakte urine in een hoeveelheid van 5-10 ml verzameld in een steriele container. Aangezien micro-organismen in de urine zich beginnen te vermenigvuldigen bij kamertemperatuur, moet het monster binnen 1-2 uur naar het laboratorium worden gebracht om onjuiste resultaten te voorkomen bij het kwantificeren van de bacteriuriteit. Als het niet mogelijk is om aan deze eis te voldoen, is het mogelijk om het urinemonster maximaal 12 uur op te slaan bij een temperatuur van 4 ° C in een koelkast.

    Bloed: bloedkweek (detectie van bacteriëmie) is noodzakelijk als u de ontwikkeling van een systemisch ontstekingssyndroom vermoedt. Aanhoudende hyperthermie, rillingen, hypothermie, leukocytose, tekenen van multiorgan dysfunctie dienen als categorische indicaties voor microbiologisch onderzoek van bloed. Bloedmonsters worden zo vroeg mogelijk genomen, vanaf het begin van koorts 2-3 maal met een interval van 30-60 minuten vanaf de perifere aderen van de bovenste ledematen (bloed nemen op een hoogte van koorts verhoogt de gevoeligheid van de methode niet, de optimale hoeveelheid afgenomen bloed wordt belangrijker voor het detecteren van de etiologie van de ziekte). Optimaal gebruik van standaard commerciële flessen met voorbereide voedingsmedia voor de teelt van aërobe micro-organismen en strikte anaëroben. Speciale aandacht voor de naleving van de regels voor asepsis: de huid op de plaats van de venapunctie wordt behandeld met een 1-2% -ige oplossing van jodium of povidoniodine met bewegingen van het midden naar de periferie gedurende ten minste 1 minuut. Na desinfectie is palpatie van de plaats voor de venapunctie onaanvaardbaar. Onmiddellijk voor het doorprikken van de ader, wordt de huid behandeld met een 70% ethanoloplossing. De manipulatie wordt uitgevoerd in steriele handschoenen. Plastic doppen worden uit de flessen verwijderd, rubberen stoppen worden afgeveegd met 70% ethanoloplossing. Nadat ze bloed uit een ader hebben genomen, wisselen ze de naald en brengen ze bloedrubbers door de injectieflacon (ongeveer 10 ml bloed zit in elk van de twee injectieflacons). Bij kinderen jonger dan 1 jaar oud neem 0,5 - 1,0 ml bloed in één fles. Bij kinderen van 1 tot 6 jaar is het totale volume bloed dat wordt afgenomen 1 ml voor elk levensjaar, en dit volume wordt verdeeld over twee flessen. Bij kinderen en volwassenen met een gewicht van 30 tot 80 kg wordt 10-20 ml bloed verdeeld tussen twee injectieflacons.

    Het nemen van één monster uit de perifere ader en de andere uit de katheter is alleen in uitzonderlijke gevallen toelaatbaar: identificeer indien nodig de katheter-geassocieerde bacteriëmie of in geval van objectieve problemen die gepaard gaan met venapunctie.

    MICROSCOPISCHE STUDIE VAN KLINISCHE MONSTERS

    Een belangrijke fase van microbiologisch onderzoek bij de diagnose van soa's en opportunistische infecties. Hiermee kunt u een voorlopige beoordeling van de kwalitatieve en kwantitatieve samenstelling van de microflora in de pathologische focus zodat, beoordeelt de kwaliteit van de vangst materiaal (overeenkomend met de plaats van de ontsteking, zoals de aanwezigheid van het vaginale epitheel in schraapsel van de baarmoederhals, vormt een schending van de selectieregels bioassays), alsook voor het identificeren van de micro-organismen niet groeien op gewone voedingsmedia (gonokokken, trichomonaden, strikt anaerobe bacteriën).

    De gevoeligheid van de methode van lichtmicroscopie ligt op het niveau van detectie van micro-organismen in een hoeveelheid van 4-5 lg CFU / ml en meer. Daarom kunnen in sommige gevallen etiologisch significante micro-organismen worden gedetecteerd door microscopie. Dit verwijst in de eerste plaats naar strikt anaerobe bacteriën, meestal met een laag pathogeen vermogen, hun etiologische rol manifesteert zich op een hoog kwantitatief niveau na accumulatie in de bron van infectie. Gezien bijzonderheid van vele soorten morfologie strikt anaëroben (bakteroidyprevotelly, fuzobakterii, Mobiluncus, veylonelly, leptotrihii) en mikroaerofila gardnerelly hun detectie in Gram-gekleurde uitstrijkjes afscheiding bewijst hun etiologische rol. Fundamenteel is de microscopie van vaginale uitstrijkjes bij de diagnose van bacteriële vaginose en andere vaginale infecties.

    De meeste optionele anaerobe DIM's hebben echter geen morfologische originaliteit en hun mate van pathogeniteit en gevoeligheid voor antibiotica is integendeel extreem divers. Daarom is voor UPM het culturele onderzoek noodzakelijk. Ook diagnose van bacteriële vaginose, microscopische methode heeft het voordeel ten opzichte van de cultuur onderzoek voor de diagnose van relatief zeldzaam in de vruchtbare leeftijd staten vaginale microecology: Cytolytische vaginose, tussenvorm microcenosis, vaginale epitheel atrofie (laatste kenmerk van de menopauze leeftijd).

    Diagnose van vulvovaginale candidiasis kan meestal worden uitgevoerd door uitstrijkmicroscopie van een afneembare vagina om in gekleurde of natieve uitstrijkjes van de elementen van de schimmel te detecteren: ontluikende gistcellen, fragmenten van pseudomycelium met blastosporen. Detectie van schimmelelementen in uitstrijkjes duidt op een groot aantal ervan (meer dan 4-5 lg CFU / ml) en gaat meestal gepaard met een uitgesproken leukocytenreactie in een vaginaal uitstrijkje en klinische manifestaties van het ontstekingsproces in de vagina, wat voldoende is om de klinische diagnose van vaginale candidiasis te bevestigen.

    Bij de laboratoriumdiagnostiek van gonorroe wordt allereerst microscopie van uitstrijkjes uit de urethra en het cervicale kanaal uitgevoerd (als er geen indicaties zijn voor het onderzoeken van andere loci: keelholte, bindvlies, rectum). Je zou moeten proberen om parallel te doen voor 2 slagen van elke locus voor blauwkleuring en Gram. Voor acute gonorroe gekenmerkt door de afwezigheid of geringe aantal vertegenwoordigers van de normale microflora (lactobacilli), een groot aantal neutrofiele leukocyten en de aanwezigheid van gramnegatieve diplococci aangebracht in leukocyten (het verschijnsel onvoltooide fagocytose) en zonder leukocyten. Chronische gonorroe wordt gekenmerkt door de aanwezigheid van verschillende microflora samen met gramnegatieve diplococci binnen en buiten leukocyten en een groot aantal neutrofielen. Meestal kan de diagnose van gonorroe worden gemaakt op basis van microscopie van Gram-uitstrijkjes. Echter, zwangere vrouwen, jongeren en kinderen zeker culturele studies met soorten identificatie van Neisseria gonorrhoeae te onderscheiden van niet-pathogene Neisseria, die bestanddelen zijn van normale vaginale microflora bij meisjes te herkennen, en in het geval van het nemen van materiaal uit de orofarynx moeten zich bewust zijn van het grote aantal soorten niet-pathogene Neisseria in deze uitstrijkjes in ieder leeftijd.

    De microscopische methode blijft momenteel de belangrijkste bij de diagnose van urogenitale trichomoniasis. Voer een onderzoek uit naar de inheemse drug en / of gekleurde uitstrijkjes. Microscopie van het inheemse medicijn, het is belangrijk om te onthouden dat vers materiaal (afneembare urethra, vagina) moet worden onderzocht - in de voorbereiding onthullen ze levende, mobiele Trichomonas. Om dit te doen, bereidt u het medicijn voor volgens de methode van "verpletterde" druppel (genomen als een ontlading met de toevoeging van warme 0,9% natriumchloride-oplossing dichtbij de lichaamstemperatuur bedekt met een dekglas) of "hangende" druppel (de suspensie van de genomen excreties wordt in de put van de glasplaat geplaatst) en microscopisch bij een vergroting van 400 keer wanneer de condensor wordt neergelaten. Voorbereidingen voor het verven met methyleenblauw, Gram of Romanovsky - Giemsa worden bereid uit dit materiaal. De diagnose wordt gesteld op basis van de identificatie van typische vormen van Trichomonas vaginalis in uitstrijkjes.

    Bij het evalueren van de resultaten van vaginale uitstrijkjesmicroscopie moet men letten op de volgende punten:

    • conditie van het vaginale epitheel: gedomineerd door de cellen van de oppervlakte-, tussen- of parabasale laag; de aanwezigheid van zogenaamde "sleutel" -cellen - oppervlakte-epitheelcellen die dicht bedekt zijn met kleine gramvariabele staafjes die eraan hechten, de celranden verbergen (figuur 6-1), of "valse sleutelcellen" - verhoogde adhesie op de epitheelcellen van gram-positieve staafjes, meestal lactobacillen ( Fig. 6-2);
    • leukocytenreactie: de aanwezigheid, ernst, manifestaties van fagocytose, de voltooiing ervan;
    • samenstelling van microflora: kwantitatieve en kwalitatieve beoordeling door morfotypen en kleureigenschappen.

    Fig. 6-1. Valse sleutelcellen (Gram-uitstrijkje microscopie).

    Fig. 6-2. Normotsenose (microscopie van Gram-uitstrijkjes). De evaluatie van de totale microbiële contaminatie wordt uitgevoerd op een 4-puntensysteem (Nugent-criteria, enigszins aangepast door ons) - door het aantal microbiële cellen gedetecteerd in hetzelfde gezichtsveld tijdens microscopie met onderdompeling:

    + - maximaal 10 microbiële cellen in het gezichtsveld - het minimumaantal; ++ - van 11 tot 100 microbiële cellen in het gezichtsveld - een gematigd aantal; +++ - van 100 tot 1000 microbiële cellen in het gezichtsveld - een groot aantal;

    ++++ - meer dan 1000 microbiële cellen in het gezichtsveld - een enorme hoeveelheid.

    De kwalitatieve beoordeling van de vaginale microflora omvat de differentiatie van alle morfotypen op basis van hun tinctorische eigenschappen en morfologische kenmerken. Er zijn morfotypes van lactobacilli, fusobacteriën, bacteroïden, mobilunkusov, leptotrichia, weillonellus, gardnerellas, evenals gram-positieve kokken, coliform sticks, gist-schimmels. Trichomonas en andere parasieten zijn te vinden in het uitstrijkje.

    Bij verdenking van syfilis is de diagnostische waarde van donkerveldmicroscopie van afneembare erosies en zweren en de methode van directe immunofluorescentie bij gebruik van AT-diagnostische diagnostiek voor T. pallidum niet verloren gegaan. Deze methoden worden gebruikt in gevallen met klinische manifestaties op de huid en slijmvliezen verdacht van syfilis. Bovendien kunnen preparaten voor microscopie worden bereid uit punctate regionale lymfeknopen, hersenvocht, vruchtwater. Erozivnoyazvennuyu oppervlak voorzichtig (om niet ontvangen bloeden) werd gezuiverd met een gaasje bevochtigd werd 0,9% natriumchloride-oplossing, daarna voorzichtig openen en sluiten van de twee vingers voet ulcera / erosies, stimuleren de afscheiding van sereuze vloeistof, die bacteriologische lus maken of zacht aanbrengen op eroderende glasplaat op het oppervlak. De resulterende sereuze ontlading wordt gemengd met een gelijke hoeveelheid 0,9% natriumchlorideoplossing, bedekt met een afdekglas en het natieve preparaat wordt microscopisch onderzocht om het pathogeen te detecteren voor een aantal kenmerkende morfologische tekenen en type bewegingen. Bepaalde ervaring is vereist om, in microscopie, licht treponema te onderscheiden van treponemcommensals van het urogenitale kanaal.

    Meer objectief kan de diagnose zijn van microscopiepreparaten met behulp van directe immunofluorescentie. In deze gevallen wordt de afvoer van een glasplaatje uit weefselvloeistoffen, de oppervlakken van pathologische gebieden (inclusief autopsiemateriaal) aan de lucht gedroogd, gefixeerd met ethanol of methanol. Daarna wordt een anti-treponemal globuline specifiek voor T. pallidum op het preparaat aangebracht. Microscopisch onderzoek van het middel wordt gedetecteerd door een felgroene specifieke fluorescentie.

    Immunoluminescentiemethode - de belangrijkste en in laboratoriumdiagnostiek van HG, terwijl bij de bereiding van het pathologische materiaal Ag-virus wordt gedetecteerd. Gewoonlijk wordt de methode van directe immunofluorescentie gebruikt, die het mogelijk maakt om beide soorten HSV en de HSV1- en HSV2-serotypen afzonderlijk te bepalen. De gevoeligheid en specificiteit van de methode hangen af ​​van de kwaliteit van de gebruikte diagnosekits. Het materiaal voor het onderzoek is meestal de vloeistof van de geopende vesicles, de afvoer van erosieve oppervlakken van de huid en slijmvliezen of schrapen van de wanden van het cervicale kanaal (met een latente vorm van infectie). Het materiaal wordt met een bacteriologische lus of een speciaal wattenstaafje genomen en op een glasplaatje overgebracht.

    Bij urogenitale chlamydia is de detectie van Ar chlamydia met behulp van immunofluorescentiemicroscopie een van de toonaangevende diagnostische methoden voor laboratoria. Gewoonlijk wordt directe immunofluorescentie gebruikt, tijdens welke monoklonale antilichamen worden toegepast op verschillende Chlamydia Ag - lipopolysaccharide (groep), de belangrijkste eiwitsoort van de buitenmembraan van Chlamydia en antilichamen tegen de recombinante Ag-chlamydia. De kwaliteit van de diagnostiek bepaalt de mate van gevoeligheid van de methode. De kwaliteit van het nemen van het materiaal is van groot belang bij het evalueren van de resultaten van directe immunofluorescentie: in een uitstrijkje op het glas van een monster dat uit het cervicale kanaal wordt genomen, moeten cilindrische epitheelcellen aanwezig zijn en er mogen geen squameuze epitheliale cellen, erythrocyten en leukocyten zijn. Het resultaat wordt als positief beschouwd als in de uitstrijkjes van een afneembare microscoop met een fluorescentiemicroscoop op een oranjebruine achtergrond van epitheelcellen minstens 5 elementaire lichamen gevonden worden met een toename van 100 maal. Vanwege mogelijke foutpositieve resultaten wordt deze methode niet aanbevolen voor de studie van materialen die zijn afgeleid van de nasofarynx en het rectum.

    CULTURAAL ONDERZOEK

    De methode van het planten en isoleren van zuivere culturen van pathogenen van de ziekte dient als de "gouden standaard" van microbiologische diagnostiek. Samen met microscopie is cultureel onderzoek de belangrijkste methode voor de diagnose van gonorroe, trichomoniasis en chlamydia. Moleculaire en biologische onderzoeksmethoden zijn nog niet specifiek genoeg om deze STI-pathogenen te detecteren om klassieke methoden te vervangen, maar ongetwijfeld behoort de toekomst toe aan hen. Een andere situatie is ontstaan ​​met opportunistische infecties van het genitaal kanaal, waarvan het aantal in het tijdperk van antibiotica en de verstedelijking van het maatschappelijk leven gestaag toeneemt, hun etiologische structuur en gevoeligheid voor antibiotica veranderen dynamisch. Veelvuldige antibioticaresistentie van deze micro-organismen zorgt ervoor dat de behandeling faalt, daarom wordt een adequate keuze van rationele etiotropische therapie onder moderne omstandigheden erkend als een constant klinisch probleem.

    Het is bekend dat de veroorzakers van ontstekingsprocessen van de geslachtsorganen een verscheidenheid aan UPM kunnen zijn, normaal een deel van de tijdelijke component van de inheemse (normale) microflora van de vagina en aangrenzende biotopen. Hun pathogene eigenschappen manifesteren zich alleen onder bepaalde omstandigheden, aandoeningen van de immuunhomeostase van het macrorganisme en resistentie tegen lokale kolonisatie. Onder deze omstandigheden moet de microbiologische diagnostiek rekening houden met de mogelijke etiologische rol van een breed scala van pathogenen, en niet alleen met een specifiek pathogeen, zoals bij de diagnose van klassieke infectieziekten veroorzaakt door absolute pathogenen. De taak van de studie is niet alleen de identificatie van micro-organismen gevonden in het pathologische materiaal, maar ook de reden voor hun etiologische rol in het ontstekingsproces bij deze patiënt. Daarom is het, bij het zaaien van klinisch materiaal, vooral van loci, en normaal met microflora, erg belangrijk om de meest veelzijdige voedingsmedia te gebruiken die geschikt zijn voor het kweken van een breed scala van micro-organismen. In dit geval is het noodzakelijk om rekening te houden met de kwantitatieve verhoudingen van de groei van verschillende soorten micro-organismen in het primaire zaaien, omdat het echte veroorzakende agens het vaakst de dominante rol speelt onder medewerkers. Er zijn echter soorten die in een kleine hoeveelheid pathogene eigenschappen vertonen (streptokokken van de groepen A en B, proteus, Klebsiella, Staphylococcus aureus, Listeria, enz.).

    Microbiologische diagnose van opportunistische infecties van de vagina is gebaseerd op een geïntegreerde beoordeling van de resultaten van microscopisch en cultureel onderzoek. Aldus strikt anaerobe microflora component bepaald met microscopie grammazkov - een groot aantal anaërobe morfotypes gedetecteerd door lichtmicroscopie (zij met meer dan een vaginale afscheiding van lg 6 CFU / ml), met vermelding van hun etiologische rol. Aldus anaërobe gevoeligheid voor antibiotica heeft geen klinisch haalbaar omdat de meeste van hen zijn zeer gevoelig voor antibiotica met de anti-anaërobe activiteit (clindamycine, metronidazol).

    Integendeel, met betrekking tot facultatieve aërobe en aërobe micro-organismen, is de diagnostische waarde van microscopisch onderzoek van vaginale afscheiding aanzienlijk verminderd. Dit is ten eerste het gevolg van het feit dat de pathogene mogelijkheden van deze bacteriën zich kunnen manifesteren bij een relatief kleine (3-5 lg CFU / ml) hoeveelheid, die niet wordt gedetecteerd door microscopie. Ten tweede, zelfs als de morfotypen van facultatieve anaërobe bacteriën worden gevonden in grammen, zijn ze qua soort en geslachten van bacteriën morfologisch hetzelfde (dit zijn coliform sticks of gram-positieve cocci). Tegelijkertijd kunnen hun pathogene eigenschappen en gevoeligheid voor antibiotica zeer divers zijn. Daarom is voor het kenmerkend deel fakultativnoanaerobnoy microcenosis en Microaërofiele (voornamelijk lactobacillen), die vergelijkbare morfologie met vele soorten bacteriën obligatnoanaerobnyh zijn (. Clostridia, eubacteriën, propionibacteriën et al), is het noodzakelijk Cultures - zaaien vaginale afscheiding. Hiervoor wordt 5% bloedagar gebruikt (het meest universele medium voor de meeste UPM), Saburo-agar (voor de isolatie van schimmels), MPC-medium (voor de teelt van lactobacillen).

    De resultaten van de cultuur studies bieden een kans om de soortensamenstelling en het aandeel van de verschillende soorten micro-organismen in de vereniging, met inbegrip van schimmels en lactobacillen beoordelen en bevestigen dus het behoren tot het geslacht Lactobacillus laktomorfotipov die door microscopie grammazkov werden gedetecteerd. Isolatie van pathologisch materiaal en identificeren van verschillende soorten van de familie Enterobacteriaceae, Staphylococci, Streptococci, nonfermenting bacteriën Neisseria, coryneforme bacteriën, schimmels en andere micro-organismen na het kwantificeren van de groei van de mate van hun etiologische betekenis bij de ontwikkeling van vaginitis in een bepaalde patiënt te bepalen.

    Bovendien, wanneer de diagnose van bacteriële vaginose op microscopie van Gram-negatieve uitstrijkjes gemonteerd, kweekresultaten kunnen verhoogde titers van UTM (paddestoelen, enterococci, coliforms en andere bacteriën), die complicaties na causale therapie geneesmiddelen met anti-anaërobe activiteit kan veroorzaken onthullen. In het bijzonder moet rekening worden gehouden met micro-organismen, die zelfs in lage concentraties een factor van verhoogd risico voor de foetus zijn (Listeria, Streptococcus Groepen A en B).

    Methoden voor de identificatie van nucleïnezuren

    Methoden voor detectie van DNA- en RNA-pathogenen worden momenteel hoofdzakelijk gebruikt voor de diagnose van virale infecties. Methoden voor gendiagnostiek zijn gebaseerd op de identificatie van nucleotidesequenties direct in het pathologische materiaal met behulp van moleculaire probes - kunstmatig verkregen nucleïnezuren die complementair zijn aan virale nucleïnezuren en zijn gelabeld met biotine of een radioactief label.

    Een kenmerk van de PCR-methode is meervoudig kopiëren (amplificatie, replicatie) met behulp van het DNA-polymerase-enzym van een specifiek DNA-fragment bestaande uit enkele tientallen of honderden nucleotide paren, wat uniek is, dat wil zeggen specifiek voor dit type viruspathogen. Het mechanisme van replicatie is zodanig dat de voltooiing van het fragment alleen in bepaalde startblokken kan beginnen, voor de creatie waarvan in bepaalde gebieden van het DNA primers - speciaal gesynthetiseerde oligonucleotiden - worden gebruikt. Primers zijn complementair aan sequenties binnen de grenzen van een specifiek fragment en de DNA-synthese verloopt alleen binnen deze grenzen.

    Het PCR-proces bestaat uit een groot aantal cycli van synthese (amplificatie) van een specifiek DNA-fragment, de accumulatie van een groot aantal kopieën, die vervolgens kunnen worden gedetecteerd met behulp van conventionele detectiemethoden (immunofluorescentieanalyse, elektroforese).

    ● eenvoud van uitvoering; ● mogelijkheid tot volledige automatisering; ● snelheid van verkrijgen van resultaat; ● kleine hoeveelheid pathologisch materiaal die nodig is voor onderzoek; ● mogelijkheid tot diagnose van acute, chronische, latente infecties;

    ● identificatie van niet-te-ontginnen, persistente pathogenen.

    De gevoeligheid van de PCR is de meest perfecte als een diagnostische methode (verschillende ordes van grootte hoger dan andere tests). De specificiteit van de methode is ook hoog, maar tot nu toe zijn de meeste testsystemen niet betrouwbaar genoeg om klassieke methoden voor het diagnosticeren van zelfs absolute pathogenen uit te schakelen.

    Wat opportunistische infecties betreft, kan de betekenis van moleculair genetische diagnostische methoden nog niet worden erkend als zinvol, aangezien de bepalende factor bij de ontwikkeling van dergelijke ontstekingsprocessen de kwantitatieve factor is en niet de aanwezigheid van het micro-organisme zelf in de onderzochte locus.

    Momenteel worden PCR-methoden algemeen gebruikt bij de diagnose van virale, parasitaire en bacteriële soa's, vaak als een primaire screening, en als beheersing van genezing in combinatie met andere methoden voor laboratoriumdiagnose. Met behulp van de nieuwste technologie, zoals real-time PCR en NASBA, is het mogelijk om de exacte hoeveelheid virus bij HIV-patiënten te bepalen.

    SEROLOGISCHE DIAGNOSTISCHE METHODEN

    Methoden die specifieke AT- en Ar-pathogenen identificeren. Hun rol is belangrijk, vooral in gevallen waarin de isolatie van de ziekteverwekker aanzienlijke problemen oplevert. Wanneer specifieke AT wordt gedetecteerd, is het noodzakelijk om een ​​verhoging van hun titers vast te stellen, in verband waarmee gepaarde sera worden bestudeerd met een interval van 2-3 weken. De definitie van klassen van immunoglobulinen beschrijft duidelijk de stadia van het infectieuze proces en kan in sommige gevallen dienen als een prognostisch teken van zijn beloop.

    Van groot belang zijn methoden voor het detecteren van Ag-pathogenen. Ze kunnen al in de vroegste stadia van het infectieuze proces worden gedetecteerd, wat een snelle diagnose mogelijk maakt, en kwantitatieve bepaling van Ar in de dynamiek van de ziekte dient als een criterium voor de effectiviteit van de behandeling.

    Serologische methoden zijn van het grootste belang geworden bij de diagnose van syfilis en HIV-infectie. Bij de diagnose van HIV-infectie wordt meestal een enzyme-linked immunosorbent-test gebruikt, waarmee al na 1-1,5 maanden na infectie positieve resultaten van het onderzoek kunnen worden verkregen. Positieve screeningsresultaten met behulp van enzymimmunoassay vereisen bevestiging door de immunoblot-methode, die verificatie van antilichamen tegen verschillende virale eiwitten mogelijk maakt.

    Bij de diagnose van syfilis worden momenteel verschillende serologische methoden gebruikt, die detectie van antilichamen tegen verschillende AH T. pallidum-determinanten in het lichaam mogelijk maken. Afhankelijk van het gebruikte Ag worden serologische reacties in twee groepen verdeeld: treponemal en non-treponemal. De eerste wordt gebruikt voor screening. Ze zijn technisch eenvoudig, vereisen niet veel tijd, een kwantitatieve versie van de reactie met de bepaling van AT-titer is mogelijk, waardoor ze kunnen worden gebruikt om de effectiviteit van de behandeling te beoordelen. Deze tests detecteren echter geen AT in de eerste 2-4 weken van primaire syfilis en fout-positieve en fout-negatieve reacties zijn mogelijk.

    Treponemal-tests hebben een hoge specificiteit en laten toe om de resultaten van niet-treponemale tests te bevestigen. Maar treponemal tests waren onbetrouwbaar in de studie van cerebrospinale vloeistof (behalve de reactie van directe hemagglutinatie), ze worden ook niet gebruikt als een controle voor de effectiviteit van de behandeling en de mogelijkheid van vals positieve reacties is niet uitgesloten.

    Met opportunistische bacteriële infecties, waarvan de veroorzakende agentia veel gemeenschappelijke argens hebben met het argulaire Ag van de gastheer en die dienen als zwakke stimulatoren voor de productie van specifieke antilichamen, worden serologische diagnostische werkwijzen praktisch niet gebruikt.

    INTERPRETATIE VAN DE RESULTATEN VAN MICROBIOLOGISCH ONDERZOEK

    EVALUATIE VAN DE RESULTATEN VAN MICROBIOLOGISCHE ONDERZOEKEN VAN DE GEFACILITTEERDE VROUWELIJKE GENITALE ORGANEN

    Bij de beoordeling van de uitkomsten van het microbiologisch onderzoek van gescheiden genitale verminking bij vrouwen moet worden beschouwd als een set van attributen in elk geval: data microscopie primaire uitstrijkje materiaal, waarvan de resultaten direct zaaien op vaste voedingsbodems (kwantitatieve schatting van de groei van verschillende types), evenals de klinische symptomen van de ziekte en de voorgeschiedenis van de patiënt. Dus in het onderzoek materiaal van gesloten holtes (punctata tumorgroei in het bekken, vruchtwater) en organen, normaal steriele (uterus inhoud schrapen endometrial stukken van organen en weefsel verwijderd tijdens een operatie), de groei van micro-organismen, met name in monocultuur, bewijs van hun etiologische rol. In de studie van materiaal loci en normaal gesproken met diverse microflora, hechten veel belang aan schatten soortensamenstelling kwantificeren van de groei van verschillende soorten gekweekt in primaire plating, de uniformiteit van de resultaten in herhaalde onderzoek en klinische gegevens. Op basis van de geïntegreerde beoordeling van de resultaten van microscopie en kweek van de afvoer van de vagina, kunnen de volgende microbiologische criteria worden voorgesteld voor het beoordelen van de toestand van vaginale microcenose voor individuele nosologische vormen bij vrouwen in de reproductieve leeftijd.

    NORMOTSENOZ
    • Microscopie van een met Gram gekleurde vlek (Fig. 6-3): ♦ Het vaginale epitheel wordt weergegeven door de cellen van de oppervlaktelagen, cellen van de tussenlaag komen minder vaak voor (de verhouding kan variëren afhankelijk van de fase van de menstruatiecyclus, zwangere vrouwen hebben veel tussenliggende cellen), er zijn geen "sleutelcellen" soms worden 'valse sleutel'-cellen aangetroffen; ♦ de leukocytenreactie is afwezig of zwak tot expressie gebracht - geïsoleerde leukocyten in het gezichtsveld; ♦ het totale aantal micro-organismen is matig of groot; ♦ het dominante morphotype is lactobacilli, andere rotypes zijn afwezig of hun aantal wordt berekend

    enkele microbiële cellen in zeldzame gezichtsveldgebieden.

  • Cultureel onderzoek: ♦ totale microbiële besmetting - 6-8 lg CFU / ml; ♦ absolute overheersing van lactobacillen;

    ♦ UPM in lage titer (minder dan 3 lg CFU / ml) of afwezig.

    Fig. 6-3. "Sleutel" -cellen (Gram-uitstrijkje-microscopie).

    BACTERIËLE VAGINOSE
    • Microscopische Gram gekleurd uitstrijkje (fig. 6-4): ♦ vaginaal epitheel bevat de cellen van de oppervlaktelagen zeldzaam tussenliggende cellen vaak - "key" cellen; ♦ leukocyt reactie gewoonlijk afwezig is; ♦ totale aantal micro-organismen massieve, minder - geweldig;

    ♦ morphotypen van strikte anaëroben en gardnerella overheersen, lactomorfotypes ontbreken of worden niet als één bepaald in alle gezichtsveldgebieden.

  • Kweekmethode: ♦ totale microbiële besmetting overschrijdt 9 lg CFU / ml; polymicrobiële microflora met absolute prevalentie van obligate anaërobe soorten en gardnerella; ♦ als alleen aërobe kweekomstandigheden worden gebruikt, is de groei van micro-organismen afwezig of wordt UPM-groei waargenomen, vaak in een kleine titer;

    ♦ er is geen groei van lactobacillen of hun titer is sterk verminderd (minder dan 5 lg CFU / ml).

    Fig. 6-4. Bacteriële vaginose (Gram-uitstrijkje microscopie).

    VAGINAAL KANDIDOSIS

    Afhankelijk van de concentratie van schimmels in de afvoer van de vagina en de bijbehorende microflora, kunnen 3 vormen van candida-vaginale infectie worden onderscheiden.

    • Microscopie uitstrijkjes gekleurd met Gram kleuring (Figuur 6-5.): ♦ vaginaal epitheel overwegend oppervlakkige lagen, maar kan zelfs vele tussen- en parabasale cellen (evenredig met de ernst van klinische verloop van de ziekte); ♦ matige leukocyt reactie (10-15 leukocyten in gezichtsveld) tot een uitgesproken (30-50 of meer leukocyten in het gezichtsveld); ♦ het totale aantal micro-organismen is matig of groot;

    ♦ morphotypes van lactobacilli domineren, gistcellen zijn aanwezig, fragmenten van pseudomycelium met blastosporen.

  • Kweekmethode: ♦ het totale aantal micro-organismen niet hoger is dan 8 lg CFU / ml; ♦ gistschimmels zijn aanwezig in een titer van meer dan 4 lg CFU / ml;

    ♦ Lactobacilli worden gezaaid in een titer van meer dan 6 lg CFU / ml.

    Fig. 6-5. Candida vaginitis (uitstrijkje microscopie, Gram-gekleurd).

    De combinatie van bacteriële vaginose en candida vaginitis.

    • Microscopische Gram gekleurd uitstrijkje (figuur 6-6.): ♦ vaginaal epitheel hoofdzaak oppervlaktelagen aanwezig "key" epitheelcellen, ♦ matige of ernstige leukocyt reactie; ♦ totale aantal micro-organismen of grote massieve; ♦ gedomineerd morfotypes strikt anaërobe en Gardnerella gistcellen en / of fragmenten van de schimmel pseudomycelium zijn aanwezig;

    ♦ lactomorfotypen ontbreken of afzonderlijke zijn zichtbaar.

  • Kweekmethode: ♦ het totale aantal micro-organismen is enorm (meer dan 9 lg CFU / ml), maar wanneer gekweekt alleen onder aërobe omstandigheden, nemen alleen gistachtige schimmels in gematigde of hoge titers (4-7 lg CFU / ml) toe; ♦ er is geen groei van lactobacillen of hun lage titer (minder dan 4 lg CFU / ml);

    ♦ micro-organismen die dominant zijn in aanplant - bacteroïden, Prevollae, Gardnerella, anaerobe cocci.

    Fig. 6-6. Een combinatie van bacteriële vaginose en candida vaginitis (Gram-uitstrijkje microscopie).

    Asymptomatisch vervoer van paddestoelen.

    • Microscopie van een met Gram gekleurd uitstrijkje: ♦ het vaginale epitheel wordt voornamelijk vertegenwoordigd door de cellen van de oppervlaktelagen; ♦ de leukocytenreactie is niet tot expressie gebracht, individuele leucocyten in zicht; ♦ het totale aantal micro-organismen is matig of groot.

    ♦ morphotypen van lactobacilli domineren, schimmels meestal niet onthullen of worden gevonden in zeldzame gebieden met enkele gistcellen.

  • Kweekmethode: ♦ het totale aantal micro-organismen niet hoger is dan 8 lg CFU / ml;

    NIET-SPECIFIEKE VAGINITIS

    Microscopische uitstrijkje, Gram gekleurd (figuur 6.7.): ♦ vaginaal epitheel bevat de oppervlakkige en tussenliggende cellen tijdens het ontstekingsproces meet parabasale cellen; ♦ expressie in verschillende mate leukocyt reactie (meer dan 10 leukocyten per gezichtsveld); ♦ totale micro-organismen zijn matig; ♦ er zijn geen lactobacilli of hun aantal is sterk verminderd (tot enkele in het gezichtsveld);

    ♦ morphotypes van UPM overheersen - coliform sticks of gram-positieve coccen.

    Kweekmethode: ♦ gebrek aan groei van lactobacilli of hun minimale hoeveelheid;

    • groei van optionele aërobe UPM, meestal één type in hoge onderschrift.

    Fig. 6-7. Niet-specifieke vaginitis (uitstrijkmicroscopie, Gram-gekleurd).

    INTERMEDIAIRE OPTIE VAN MICROCENOSE
    • Microscopische uitstrijkje gekleurd door Gramkleuring: ♦ bevat het vaginale epitheel oppervlakkige cellen kunnen ontmoeten single "key" cellen ilinablyudat neiging om hun formatie; ♦ leukocyten niet meer dan 10 gezichtsveld; ♦ totale aantal micro-organismen matig of groot;

    ♦ domineren morphotypen van strikte anaëroben en gardnerella gecombineerd met een gematigd verminderde titer van lactobacilli.

  • Kweekmethode: ♦ Het totale aantal micro-organismen is 6-8 lg CFU / ml; ♦ De titer van lactobacillen is verminderd, maar kan matige waarden bereiken (5-6 lg CFU / ml);

    ♦ matige titer van obligate anaëroben en gardnerella (5-7 lg CFU / ml).

    CYTOLYTISCHE VAGINOSE
    • Microscopie van een met Gram gekleurde vlek (Fig. 6-8): ♦ de overgrote meerderheid van de epitheelcellen zijn cytolyse; elementen van celvernietiging - detritus, blootgestelde kernen van oppervlakte- en tussencellen heersen in een uitstrijkje; ♦ leukocyten zijn afwezig of hun aantal is niet meer dan 10 in zicht;

    ♦ grote hoeveelheden microflora, vertegenwoordigd door typische lactobacillus-morfotypen.

  • Kweekmethode: ♦ Overvloedige groei van alleen lactobacillen;

    ♦ er is meestal geen microflora aanwezig.

    Fig. 6-8. Cytolytische vaginose (Gram-uitstrijkje-microscopie).

    VAGINAAL-EPITELIALE ATROFIE
    • (Fig. 6-9) microscopische uitstrijkje gekleurd Gram: ♦ afhankelijk van de mate van atrofie van het vaginale slijmvlies epitheel bevat verschillende verhoudingen van het aantal tussenliggende en parabasale cellen, de groei van atrofie het aantal parabasale en basale cellen verhoogt; ♦ leukocyten typisch kleiner dan 10 in zicht;

    ♦ microflora is praktisch afwezig; enkele lactomorfotypes of UPM-morfotypes zijn te vinden in zeldzame gezichtsveldgebieden.

  • Kweekmethode: ♦ lage totale microbiële besmetting (2-4 lg CFU / ml);

    ♦ lage titers van zowel lactobacillen als UPM.

    Fig. 6-9. Vaginale epitheliale atrofie (uitstrijkmicroscopie, Gram-gekleurd).

    EVALUATIE VAN DE RESULTATEN VAN MICROBIOLOGISCH ONDERZOEK VAN HET BLOED

    Bij het isoleren van typische pathogenen (Staphylococcus aureus, Listeria, Klebsiella, andere coliforme bacteriën, Pseudomonas bacillus), evenals schimmels, is zelfs één positieve hemocultuur van diagnostische waarde. Bij het isoleren van micro-organismen die worden herkend als huidsaprofyten (coagulase-negatieve stafylokokken, difteroïden, micrococcen), zijn twee positieve bloedkweken vereist om echte bacteriëmie te bevestigen.

    BEOORDELING VAN DE RESULTATEN VAN MICROBIOLOGISCHE STUDIE VAN URINE

    De mate van bacteriurie is het belangrijkste criterium bij de differentiatie van een infectieus proces in de urinewegen van de besmetting van urine met normale microflora. De graad van bacteriurie, niet meer dan 3 lg CFU / ml, meestal het gevolg van contaminatie. De graad van bacteriurie 3-4 lg CFU / ml wordt als een twijfelachtig resultaat beschouwd en de studie moet worden herhaald. De mate van bacteriurie, gelijk aan en hoger dan 5 lg CFU / ml, duidt op de aanwezigheid van een ontstekingsproces. Het is echter noodzakelijk om rekening te houden met de eigenaardigheden van de klinische manifestaties van de ziekte en de therapie die wordt uitgevoerd (niet alleen antibacterieel). Bijvoorbeeld, met een slechte passage van urine, met zijn lage relatieve dichtheid, bij pH wordt het gevonden in de urine van gezonde mensen. Monocultuur komt vaker voor bij acute ontstekingsprocessen en het wordt gecombineerd met een hoge mate van bacteriurie. Associaties van micro-organismen komen vaker voor bij chronische processen. Bij de eindevaluatie van de resultaten van microbiologisch onderzoek van urine, is het noodzakelijk om rekening te houden met de gegevens van het klinische beeld en andere laboratoriumonderzoeken.

    FACTOREN DIE HET RESULTAAT BEÏNVLOEDEN

    De betrouwbaarheid van microbiologische diagnostiek hangt in de eerste plaats af van de mate waarin de arts voldoet aan de regels voor het nemen van pathologisch materiaal voor onderzoek en het nut van informatie over de toestand van de patiënt die wordt onderzocht, aangezien de keuze van de tactieken van microbiologisch onderzoek en de interpretatie van de resultaten van deze gegevens afhangen. De volgende vereisten moeten in acht worden genomen bij het nemen en transporteren van biomaterialen voor microbiologisch onderzoek:

    ● neem materiaal van de infectiebron (waar de veroorzaker in maximale hoeveelheid is), en als het onmogelijk is om aan deze eis te voldoen, neem biologische tests met betrekking tot de bron van infectie (urine in het geval van pathologie van de nieren en blaas gescheiden van het cervicale kanaal tijdens endometritis); ● ontslag uit de vagina baarmoederhalskanaal, urethra ingenomen vóór handmatig vaginaal onderzoek; zorg ervoor dat de patiënt ten minste de laatste 3 dagen geen lokale behandeling heeft gebruikt; ● neem het materiaal vóór het begin van antimicrobiële therapie en als het niet mogelijk is om aan deze eis te voldoen, vlak voor de volgende dosis van het medicijn (wanneer de concentratie minimaal wordt); ● volg de regels van asepsis, dat wil zeggen sta niet toe dat contaminatie van het monster wordt veroorzaakt door gelijktijdig optredende microflora ● gebruik steriele gewatteerde (dacron) tampons en transportmedia (vaginale afscheiding, cervicale kanaal, wondafvoer), containers (urine, feces), spuiten (pus, exsudaat), flessen met bemonstering voedingsmedia voor bloedkweek; Voor snelle diagnostiek van virale infecties worden tamponborstels gebruikt, van waaruit het biomateriaal op een glasplaatje wordt overgebracht of in speciale transportmedia wordt geplaatst ● transporteer het materiaal dat naar het laboratorium is gebracht zo snel mogelijk in een geschikte temperatuurmodus (20-37 ° C) (niet meer dan 1-1 5 uur); als het niet mogelijk is om aan deze eis te voldoen, gebruik dan transportmedia en sla monsters op in een koelkast in huis (met uitzondering van sterke drank en bloed) ● als een anaerobe infectie wordt vermoed, moet het materiaal zo veel mogelijk worden beschermd tegen zuurstof; onmiddellijk na inname, plaats in anaerobe containers of in speciale transportmedia;

    ● in het geval van een verdenking van een gonorrheal-infectie, heeft het de voorkeur om seeden van materiaal dat is genomen met een steriele plastic lus op een dicht selectief medium te richten; Vervolgens wordt de petrischaal met zaaien in een speciale plastic zak met een hoog kooldioxidegehalte geplaatst en naar het laboratorium gestuurd.

    Onder de factoren die van invloed zijn op de betrouwbaarheid van microbiologische diagnose, kan worden vastgesteld:

    ● voorwaarden voor het nemen en vervoeren van biologisch materiaal; ● adequate selectie van microbiologische onderzoeksmethoden; ● beroepskwalificaties van microbiologen;

    ● het nut van informatie over de toestand van de patiënt die wordt onderzocht, wat belangrijk is in termen van het evalueren van de verkregen resultaten

    Het is noodzakelijk om voortdurend contact te houden met het laboratorium, gezamenlijke besprekingen van clinici en microbiologen te voeren voor het snel verwijderen van claims en vragen aan elkaar, periodiek analyseren, evalueren van werkzaamheden om het te verbeteren.